Comparison of phenotypic tests for the detection of metallo-beta-lactamases in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa

Las metalo-βeta-lactamasas (MBL) que producen las bacterias gram-negativas son un creciente problema de salud pública en todo el mundo. Las pruebas de detección para la identificación rápida y específica de estos patógenos son esenciales y deben ser incluídas entre los diagnósticos de rutina de los laboratorios. Este estudio tiene como objetivo determinar la frecuencia de MBL en aislamientos de Pseudomona aeruginosa resistentes a carbapenem y evaluar la precisión de diferentes pruebas en la detección de la producción de MBL. Entre enero de 2001 y diciembre de 2008 un total de 142 cepas de P. aeruginosa no susceptibles a imipenem fueron aisladas de muestras clínicas provenientes de pacientes hospitalizados. Estas cepas fueron examinadas por PCR, prueba de MBL-E, prueba de sinergia de doble disco (DDS), y prueba de disco combinado (DC). La concentración inhibitoria mínima (CIM; g/ml) se determinó mediante dilución en agar. Se realizó electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) a todas las muestras. La secuenciación se realizó para confirmar y definir la variante de MBL y subtipo. Por PCR y análisis de secuencia de ADN, 93 cepas fueron confirmadas como positivas para MBL. A su vez, 91 cepas fueron confirmadas para el gen blaSPM-1, 1 cepa para el gen bla IMP-1, y 1 cepa para el gen bla IMP-16. La prueba de PFGE muestra un patrón clonal. Se evaluó la sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivos y negativos para todas las pruebas. El ensayo DDS (CAZ-MPA) fue el método óptimo para la detección de la producción de MBL en las cepas de P. aeruginosa. Sin embargo, los resultados del ensayo de DC (IMP/EDTA) mostraron una estrecha concordancia con los de la DDS. Adicionalmente, el ensayo de DC permitió una interpretación más objetiva de los resultados, no requiriendo el uso de una sustancia tóxica

Metallo-βeta-lactamase (MBL)-producing gram-negative bacteria are an increasing public health concern worldwide. Screening tests for the rapid and specific identification of these pathogens are essential, and should be included among routine diagnostics in laboratories. This study aimed to determine the MBL frequency among carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates, and to evaluate the accuracy of different tests in screening for MBL production. From January 2001 to December 2008, a total of 142 imipenem-non-susceptible P. aeruginosa strains were isolated from distinct clinical samples from hospitalized patients. These isolates were examined by PCR, MBL E-test, double-disk synergy test (DDST), and combined disk (CD) test. The minimal inhibitory concentration (MIC; μg/mL) was determined by agar dilution, and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) was performed on all samples. Sequencing was performed to confirm and define the MBL variant and subtype. Using PCR and DNA sequence analysis, 93 strains were confirmed positive for MBLs, 91 strains for the blaSPM-1 gene, 1 strain for the blaIMP-1 gene, and 1 strain for the blaIMP-16 gene. PFGE displayed a clonal pattern. The sensitivities, specificities, positive and negative predictive values were evaluated for all tests. The DDST assay (CAZ-MPA) was the optimal method for screening MBL production in P. aeruginosa strains. However, the results of the CD assay (IMP/EDTA) showed close agreement with those of the DDST. In addition, the CD assay allowed a more objective interpretation and did not require the use of a toxic substance

Emergence of extended-spectrum Beta-lactamase producing Enterobacter spp. in patients with bacteremia in a tertiary hospital in southern Brazil

BACKGROUND: Extended-spectrum β-lactamases (ESBLs) are increasingly prevalent in Enterobacter spp., posing a challenge to the treatment of infections caused by this microorganism. The purpose of this retrospective study was to evaluate the prevalence, risk factors, and clinical outcomes of inpatients with bacteremia caused by ESBL and non ESBL-producing Enterobacter spp. in a tertiary hospital over the period 2004-2008.MethodsThe presence of blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, and blaPER genes was detected by polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequence analysis. Genetic similarity between strains was defined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE).Results Enterobacter spp. was identified in 205 of 4907 of the patients who had positive blood cultures during hospitalization. Of those cases, 41 (20%) were ESBL-producing Enterobacter spp. Nosocomial pneumonia was the main source of bacteremia caused by ESBL-producing Enterobacter spp. The presence of this microorganism was associated with longer hospital stays. The ESBL genes detected were: CTX-M-2 (23), CTX-M-59 (10), CTX-M-15 (1), SHV-12 (5), and PER-2 (2). While Enterobacter aerogenes strains showed mainly a clonal profile, Enterobacter cloacae strains were polyclonal. Conclusion Although no difference in clinical outcomes was observed between patients with infections by ESBL-producing and non-ESBL-producing strains, the detection of ESBL in Enterobacter spp. resulted in the change of antimicrobials in 75% of cases, having important implications in the decision-making regarding adequate antimicrobial therapy

ANTECEDENTES: Las -lactamasas de espectro extendido (BLEE) son cada vez más frecuentes en Enterobacter spp., lo que representa un desafío para el tratamiento de infecciones causadas por este microorganismo. El propósito de este estudio fue evaluar los factores de riesgo y los resultados clínicos de pacientes ingresados con bacteriemia causada por Enterobacter spp. productores de BLEE en un hospital terciario durante los años 2004-2008. MÉTODOS: La presencia de los genes blaCTX-M, blaTEM, blaSHV, e blaPER se detectó mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y análisis de la secuencia de nucleótidos. La similitud genética entre las cepas fue definida por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE). RESULTADOS: Enterobacter spp. fue identificado en 205 pacientes de un total de 4.907 que tenían cultivos positivos de sangre durante la hospitalización. De esos 205 casos, 41 (20%) eran Enterobacter spp. productores de BLEE. La neumonía nosocomial fue la principal fuente de bacteriemia causada por Enterobacter spp. productores de BLEE. La presencia de este microorganismo se asoció con una mayor estancia hospitalaria. Las BLEE detectadas fueron: CTX-M-2 (23), CTX-M-59 (10), CTX-M-15 (1), SHV-12 (5) y PER-2 (2). Mientras que las cepas de Enterobacter aerogenes presentaron un perfil principalmente clonal, E. cloacae fueron policlonales. CONCLUSIONES: Si bien no fueron observadas diferencias en los resultados clínicos entre los pacientes con infecciones causadas por cepas productoras de BLEE y no productoras de BLEE, la detección de BLEE en Enterobacter spp., resultó en el cambio de los antimicrobianos en el 75% de los casos, habiendo implicaciones importantes en la toma de las decisiones con respecto a la terapia antimicrobiana adecuada